行业标准 | WS/T 503—2017临床微生物实验室血培养操作规范

血培养是一种将新鲜离体的血液标本接种于营养培养基上，在一定温度、湿度等条件下，使对营养要求较高的细菌生长繁殖并对其进行鉴别，从而确定病原菌的一种人工培养法。常用于菌血症、真菌血症、败血症及脓毒败血症的病因学诊断。

以下是我国卫生健康委员会在2017.09.06发布并于2018.03.01实施的《临床微生物实验室血培养操作规范》中的部分内容：

1、血样采集和培养瓶接种

A.采血指征

可疑感染患者出现以下任一指征时,可考虑采集血培养：

a)体温>38℃或<36℃；

b)寒战；

c)外固血白细胞计数增多(计数>10.0×10⁹/L，特别有“核左移”时)或减少(计数<4.0×10⁹/L)；

d)呼吸频率>20次/min 或动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)<32 mmHg；

e)心率>90次/min；

f)皮肤黏膜出血；

g)昏迷；

h)多器官功能障碍；

i)血压降低；

j)炎症反应参数如C反应蛋白、降钙素原(PCT)、1,3-β-D-葡聚糖(G试验)升高等。

A.采血时间

寒战或发热初起时采集。抗菌药物应用之前采集最佳。

B.采集套数

成人每次应采集2套~3套，每套从不同穿刺点进行采集，2d~5 d内无需重复采集。如怀疑感染性心内膜炎，应重复采集多套。儿童通常仅采集需氧瓶。有以下高危因素时应考虑厌氧瓶培养：其母产褥期患腹膜炎，或慢性口腔炎或鼻窦炎、蜂窝组织炎、有腹腔感染的症状和体症、咬伤、接受类固醇治疗的粒细胞缺乏患儿。考虑肺炎链球菌菌血症时，宜同时做脑脊液培养。

C.采血量

成人每瓶采血量8 mL~10 mL，或按照说明书采集；婴幼儿及儿童采血量不应超过患者总血量的1%，具体采血量参考说明书。若采血量充足，注射器采集的血液先注入厌氧瓶，后注入需氧瓶，碟形针采集的血液反之。若采血量不足,优先注入需氧瓶。

D.采集方法

s采集静脉血；仅在评估导管相关性血流感染时采集导管血。血培养宜单独采血，与其他检测项目同时采血，应先接种血培养瓶，以避免污染。

s采集前做好手卫生，静脉穿刺点选定后，去除血培养瓶的塑料瓶帽，切勿打开金属封口环和胶塞，使用75%乙醇或70%异丙醇消毒，自然干燥60 s。注意采血前检查血培养瓶是否完好无损、是否过期。

s在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，应戴无菌乳胶手套固定静脉。

s穿刺点皮肤消毒：

a)三步法：

第一步：75%乙醇擦拭静脉穿刺部位,待干30 s以上；

第二步：1%~2%碘酊作用30 s或1%碘伏作用60 s，从穿刺点向外画圈消毒，消毒区城直径达3 cm以上；

第三步：75%乙醇擦拭碘酊或碘伏消毒过的区域进行脱碘。

对碘过敏的患者，在第一步基础上再用75%乙醇消毒60 s，待酒精挥发干燥后采血。

b)一步法：

0.5%葡萄糖酸洗必泰作用30 s(不适用于2 个月以内的新生儿)，或70%异丙醇消毒后自然干燥(适用于2 个月以内的新生儿)。

注意穿刺点消毒后不可再碰触。

注: 其他消毒剂需要进行消毒能力和适用性验证后才可使用。

s用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头(如行第二次穿刺，换针头)，直接注入血培养瓶，不应将抗凝血注入血培养瓶。

s血液接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。

s完成工作后洗手。

s污染率评估：实验室应定期对血培养污染率进行评估，污染率应控制在3%以下。

2、血培养瓶运送

血培养瓶应在2 h之内送至实验室孵育或上机；如不能及时送检,应将血培养瓶置于室温下，切勿冷藏或冷冻。应采用密封的塑料袋和硬质防漏的容器运送标本。若运送到参考实验室，应使用符合生物安全规定的包装。

3、实验室操作方法及流程

A.添加剂

抗凝剂使用聚苗香脑磺酸钠(SPS)，浓度为 0.025%~0.05%。抗生素吸附剂推荐使用树脂。

B.手工培养法

培养基

常规培养基包括传统肉汤培养基、双相培养基、溶血肉汤培养基、真菌培养基及分枝杆菌培养基。

培养方法

推荐35℃~37℃孵育7 d，一些缓慢生长的苛养菌(如巴尔通体、李斯特菌属、布鲁菌属和奴卡菌属等)和双相真菌需要更长的孵育时间。手工法应每天或更频繁地观察肉眼可见的微生物生长，特别注意孵育48 h内的生长迹象。使用明亮的荧光灯泡或白炽灯，观察浊度、溶血、产气、表面菌落形成和血液颜色的改变，发现有微生物生长迹象进行涂片革兰染色和转种，根据涂片染色结果选择培养基类型。

C.自动化仪器培养法

培养基

商品化培养瓶包括需氧瓶、厌氧瓶、儿童瓶、真菌培养瓶及分枝杆菌培养瓶。

培养方法

35℃~37℃孵育5d。一些缓慢生长的苛养菌(如巴尔通体、李斯特菌属和奴卡菌属等)和双相真菌需要延长孵育时间。自动化血培养系统每间隔一定时间自动通过电子感应器检测微生物生长代谢过程中产生的CO₂浓度或气压变化，阳性报警后需要立即处理。对于已经培养5 d的阴性瓶不需要常规盲传或终点转种。

3、实验室操作方法及流程

即便严格遵守无菌操作，仍有3%~5%的血培养瓶中培养出皮肤(如表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、梭菌、类白喉棒状杆菌)或周围环境(如不动杆菌属、芽孢杆菌属)中常见菌。这些菌大部分为污染菌,但出现以下情况考虑可能为致病菌：

a)不同部位血培养标本培养出同一种菌；

b)多次分离出同一种菌，且药敏结果相同。

污染菌不需做药敏试验，但应向临床报告，并提示可能污染，如痤疮丙酸杆菌(皮肤寄生菌)。

血培养中两种或两种以上细菌生长，可能是复数菌菌血症，如厌氧菌菌血症时可能有多种病原菌感染；也可能是污染所致。

全文请参考国家健康卫生委员会WS/T 503—2017《临床微生物实验室血培养操作规范》

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